(本中文說明書為翻譯稿，僅供參考，應(yīng)以英文版為準(zhǔn))
貨號：3091314 (Sigma-Aldrich : GAGO20)
儲存溫度：2-8℃
產(chǎn)品描述：
酶作為一種分析工具，在食品、生化和制藥工業(yè)中得到了廣泛的應(yīng)用。酶的方法是特異性的，可重復(fù)的，靈敏的，快速的，因此，是分析目的的理想方法。由于酶的高特異性和敏感性，定量分析可以在很少或沒有樣品準(zhǔn)備的情況下進(jìn)行1-5。
本試劑盒用于食品和其它材料中葡萄糖的定量、酶法測定。各種出版物已經(jīng)報道了在不同的系統(tǒng)和樣本上使用該試劑盒，包括果蠅6-8、牛糞9、培養(yǎng)的小鼠肌肉細(xì)胞10、HEPG2細(xì)胞11和水生生物12。
原理：
• 葡萄糖氧化酶將葡萄糖氧化成葡萄糖酸和過氧化氫。
• 過氧化氫在過氧化物酶的存在下與鄰二苯胺反應(yīng)生成有色產(chǎn)物。
• 氧化的鄰二苯胺與硫酸反應(yīng)生成更穩(wěn)定的有色產(chǎn)品。
• 在540 nm處測得的粉紅色的強(qiáng)度與原始葡萄糖濃度成正比。
試劑盒組成：
1、葡萄糖氧化酶/過氧化物酶試劑
• 將未打開的試劑盒試劑保存在2-8℃。每個膠囊包含500單位的葡萄糖氧化酶(黑曲霉)，100單位(purpurogallin units)的過氧化物酶(辣根)和緩沖鹽。
• 將膠囊內(nèi)容物倒入琥珀色的瓶子中。
• 將這些物質(zhì)溶解在39.2 mL去離子水中。
• 該溶液在2-8℃最多穩(wěn)定一個月，在-20℃冷凍至少六個月。
• 如果出現(xiàn)渾濁，請丟棄。
2、鄰二苯胺試劑
• 將未打開的試劑盒試劑保存在2-8℃。盡量減少曝光。預(yù)先稱量的小瓶中含有5毫克的鄰二苯胺鹽酸鹽。
• 用1.0 mL的去離子水重新配制鄰二苯胺小瓶的內(nèi)容物。
• 翻轉(zhuǎn)樣品瓶幾次以溶解。
• 避免將試劑暴露在光線下。
• 溶液在2-8℃下穩(wěn)定3個月。
3、分析試劑
• 向裝有39.2 mL葡萄糖氧化酶/過氧化物酶試劑的琥珀瓶中加入0.8 mL鄰二苯胺試劑。
• 將瓶子倒過來幾次混合。
• 盡量減少暴露在光線下。
• 溶液在2-8℃下穩(wěn)定1個月。
• 如果出現(xiàn)渾濁或其他顏色，請丟棄。
4、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液
• D-葡萄糖，在0.1%的苯甲酸中為1.0 mg/mL。
• 該標(biāo)準(zhǔn)可追溯到NIST標(biāo)準(zhǔn)，并提供即用型。
• 在2-8℃穩(wěn)定至少六個月。
• 如果出現(xiàn)混濁，請丟棄。
必需但未提供試劑：
硫酸，ACS試劑，為18M硫酸試劑。在去離子水中準(zhǔn)備6M溶液。
儀器：
1、分光光度計或比色計：可在540nm下測定吸光度。
2、比色皿。
3、試管，18 mm×150 mm
4、移液器：能夠準(zhǔn)確分配20 μL至2.0 mL的體積。
5、能保持溫度在37℃的水浴鍋
注意事項(xiàng)和免責(zé)聲明：
本試劑僅供科研使用，不能用于藥品、家庭以及其他用途。有關(guān)危險和安全操作規(guī)程的信息，請參閱安全數(shù)據(jù)表。
操作步驟：
樣品制備：
液體：
• 用去離子水將樣品稀釋至葡萄糖濃度為20-80μg/mL。
• 如有必要，對溶液進(jìn)行過濾或去蛋白處理以使其澄清。
• 樣品葡萄糖含量較低且顏色較深時，應(yīng)予以脫色處理。
• 含碳酸或發(fā)酵樣品，須脫氣處理。
固體：
• 稱量0.1mg樣品。
• 用去離子水提取樣品。可以將溶液加熱(<75℃)以幫助萃取。
• 用去離子水稀釋提取液品至葡萄糖濃度為20-80μg/mL。
• 如有必要，對溶液進(jìn)行過濾或去蛋白處理以使其澄清。
測定：
方法1：標(biāo)準(zhǔn)曲線中的葡萄糖濃度
1、吸取以下溶液到相應(yīng)的試管中：
| 試管 | 水（ml） | 樣品（ml） | 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（ml） |
| 空白試劑 | 1.00 | - | - |
| 1# 試管 | 0.98 | - | 0.02 |
| 2# 試管 | 0.96 | - | 0.04 |
| 3# 試管 | 0.94 | - | 0.06 |
| 4# 試管 | 0.92 | - | 0.08 |
| 測試 | - | 1.00 | - |
2、計時起點(diǎn)，通過向第一個試管中加入2.0 mL的測定試劑開始反應(yīng)并混合。在向每個后續(xù)試管中添加測定試劑之間，要間隔30至60秒。
3、讓每個試管在37℃下反應(yīng)30分鐘。通過在每個試管中加入2.0 mL的6M硫酸溶液，以30-60秒的間隔停止反應(yīng)。小心地將各管徹底混合。
4、在540 nm處測量每個試管對空白試劑的吸光度。
方法2：單一標(biāo)準(zhǔn)品中的葡萄糖濃度
1、吸取以下溶液到相應(yīng)的試管中：
| 試管 | 水（ml） | 樣品（ml） | 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液（ml） |
| 空白試劑 | 1.00 | - | - |
| 1# 試管 | 0.95 | - | 0.05 |
| 測試 | - | 1.00 | - |
2、計時起點(diǎn)，通過向第一個試管中加入2.0 mL的測定試劑開始反應(yīng)并混合。在向每個后續(xù)試管中添加測定試劑之間，要間隔30至60秒。
3、讓每個試管在37℃下反應(yīng)30分鐘。通過在每個試管中加入2.0 mL的6M硫酸溶液，以30-60秒的間隔停止反應(yīng)。小心地將各管徹底混合。
4、在540 nm處測量每個試管對空白試劑的吸光度。
結(jié)果：
計算方法1：
對于標(biāo)準(zhǔn)品，繪制540 nm處的吸光度(y軸)與葡萄糖的毫克含量(x軸)標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果標(biāo)準(zhǔn)曲線不是線性的，則結(jié)果將不準(zhǔn)確。重復(fù)測定。
對于測試，從標(biāo)準(zhǔn)曲線確定葡萄糖毫克數(shù)。
將上面確定的毫克葡萄糖乘以樣品制備中的稀釋倍數(shù)。
計算方法2：
將上面確定的毫克葡萄糖乘以樣品制備中制備的稀釋倍數(shù)。
參考文獻(xiàn)：
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